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人ELISA試劑盒常用試劑配置
更新時間:2013-10-15   點擊次數(shù):1414次

 人ELISA試劑盒實驗中的封閉液小知識

Elisa試驗中我們會注意到Elisa試劑盒說明書上寫到封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,那首先了解一下蔗糖封閉的原理:
1、Elisa實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用。
2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保護Elisa板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。
4、蔗糖溶液一般在Elisa板子經(jīng)過BSA封閉后加,當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理。
至于哪一種更好需要你實驗后來驗證,但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了,不會影響實驗的準確度。
tween的作用:雖然不能單獨封閉,但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用,假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-
附件:Elisa實驗中緩沖溶液等試劑的配置
Elisa實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ), 人ELISA試劑盒 簡單介紹一下Elisa試劑以及各種溶液的配置方法:(1) Elisa實驗包被緩沖液;(2) Elisa實驗洗滌緩沖液; (3) Elisa實驗稀釋液;(4)Elisa實驗終止液;(5)Elisa底物緩沖液;(6)Elisa實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液;(7) Elisa實驗ABTS使用液;(8)ELISC。

ELISA試驗中的試劑
(1) Elisa實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
NaHCO3 1.59克
NaHCO3  2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2) Elisa實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M
KH2PO4       0.2克
Na2HPO4·12H2O  2.9克
NaCl        8.0克
KCl         0.2克
Tween-20 0.05%  0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3) Elisa實驗稀釋液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
(4) Elisa實驗終止液(2M H2SO4):
蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
(5) Elisa底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml
0.1M 檸檬酸(19.2克/L)      24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6) Elisa實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml
底物緩沖液(PH5.5)    10ml
0.75%H2O2 32μl
(7) Elisa實驗ABTS使用液:
ABTS        0.5mg
底物緩沖液(PH5.5)  1ml
3%H2O2 2μl
(8)Elisa實驗封閉液:
 人ELISA試劑盒牛血清白蛋白(BSA) 5克
加洗滌緩沖液至100ml。
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。
為了保證Elisa實驗的準確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要,將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔,嚴防交叉污染。

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