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ELISA法在實驗中手工測定的影響因素分析
更新時間:2013-10-06   點擊次數(shù):1625次

        ELISA法多年來廣泛應用于血站和醫(yī)院的實驗室中,相對于其它檢測方法,ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復性好的特點,并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點,但是在一些測定實驗中,結果會出現(xiàn)誤差影響測定結果。這篇文章總結了很多的實驗經(jīng)驗從幾個方面分析影響結果的因素。

1 ELISA試劑盒
(1)抗原、抗體活性對效價的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活,結果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高,對雜質(zhì)的反應靈敏度也高,實驗中空白對照OD值偏高或假陽性。
(2)酶結合物濃度過高,也會導致OD值假性增高。

2 試驗儀器
(1)加樣器是否經(jīng)過校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不,會使結果忽高忽低。
(2)每次洗板前,應檢查洗板機針孔有無堵塞。

3 實驗操作
(1)檢測前先將ELISA試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時放回冰箱冷藏,以免造成試驗結果假性降低。
(2)加樣時注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結果的準確性。
(3)洗滌不充分,會使結果假性增高,過分洗滌呈假陰性。
(4)比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時,底部留有水汽,應將板底擦干后進行比色,水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高。
(5)抗原與抗體反應達到*平衡,依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落,溫度低于4℃,影響反應速度。
ELISA實驗的影響因素較多,這就更為嚴格的要求我們在實驗過程當中要遵守操作規(guī)范,做到細致嚴謹,zui大限度或是杜絕各種因素的影響,從而得到準確無誤的測定結果,更好的服務于我們的科研工作。

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