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關(guān)于動物細(xì)胞株工藝開發(fā)經(jīng)驗(yàn)分享
更新時間:2021-10-22   點(diǎn)擊次數(shù):1249次
   動物細(xì)胞株大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)是指以生物反應(yīng)器培養(yǎng)細(xì)胞為基礎(chǔ),實(shí)現(xiàn)動物細(xì)胞工業(yè)化和規(guī)?;a(chǎn),用于生產(chǎn)疫苗、單抗等生物制品。為提升生物制品的生產(chǎn)效率,保證產(chǎn)品質(zhì)量,動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)過程工藝需考慮高表達(dá)工程細(xì)胞系、個性化細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用、生物反應(yīng)器工藝優(yōu)化等。
  
  目前,上千升規(guī)模的生物反應(yīng)器做國內(nèi)應(yīng)用也越來越廣泛,如何實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)工藝放大是首先要考慮的,涉及生物反應(yīng)器高徑比,剪切力(通氣方式、槳葉設(shè)計(jì)),通氣獲得DO效率(與攪拌系統(tǒng)、通氣方式、氣體流量),積累CO2的排出等內(nèi)容,而這些因素往往是非線性放大的,這與生物反應(yīng)器設(shè)備的設(shè)計(jì)、放大的關(guān)系為密切。DO、pH、Temp、培養(yǎng)基流加策略等則是線性放大的。生物反應(yīng)器工藝放大的困難往往在于這些非線性放大因素。
  
  關(guān)于動物細(xì)胞株工藝開發(fā),有幾條經(jīng)驗(yàn)可考慮:
  1、pH控制
  高pH值的培養(yǎng)條件,即偏堿環(huán)境更容易導(dǎo)致乳酸生成。在流加培養(yǎng)時,可根據(jù)葡萄糖消耗速率添加葡萄糖,一般控制培養(yǎng)液中的葡萄糖濃度高于1-2.5g/L。同時控制合適的DO濃度,DO不足時細(xì)胞無氧代謝,不走TCA循環(huán),導(dǎo)致乳酸產(chǎn)生。在不補(bǔ)加堿液的時候,pH的變化,一定程度上也可用于細(xì)胞生長狀態(tài)的評價。
  
  2、DO控制
  細(xì)胞從接種到收獲,隨著細(xì)胞密度或細(xì)胞狀態(tài)的變化,對溶氧的需求是一個由弱到強(qiáng),再至穩(wěn)定,然后減少的變化過程。基于一定細(xì)胞密度下的溶氧消耗速率,是衡量細(xì)胞生長、細(xì)胞代謝,甚至是細(xì)胞生理狀態(tài)的重要指標(biāo)。DO值的高低,能影響蛋白的糖基化等轉(zhuǎn)錄后修飾。
  
  3、CO2排出
  在高密度培養(yǎng)細(xì)胞時,反應(yīng)器內(nèi)CO2的積累往往成為一個問題,其通過影響培養(yǎng)環(huán)境的pH值、滲透壓對培養(yǎng)過程產(chǎn)生影響。小孔徑的通氣管,能提高通氣效率,但排CO2效率低;而大孔徑的通氣管,通氣效率降低,但驅(qū)趕CO2效果好。所以在生物反應(yīng)器設(shè)計(jì)時,需要綜合考慮。
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