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X-gal
更新時間:2011-05-13   點擊次數(shù):6984次

X-gal

 

外觀:白色粉末
純度(HPLC):>;;=99%
比旋光度:[&;alpha;]20D -62º;; ±;; 2 (c=1 in DMF/H2O 1:1)
水分:&;le; 1%
溶解性:清澈溶液(2%in DMF)
儲存:4℃ 避光避潮;長期存放-20℃
儲液配制:溶解100mg X -gal 于5 mL DMF中,分裝成1ml,用鋁箔包裝避光保存。
用途:X-Gal是&;beta;-半乳糖苷酶(&;beta;-galactosidase)的顯色底物,在&;beta;-半乳糖苷酶的催化下會產(chǎn)生藍色產(chǎn)物。常用于&;beta;-半乳糖苷酶的原位染色檢測以及藍白斑篩選。溶于DMSO,溶解度可達20mg/ml。也溶于DMF。
藍白斑篩選:
1)載體質(zhì)粒和轉(zhuǎn)化受體菌株:
實驗所使用的載體質(zhì)粒DNA為pBS,轉(zhuǎn)化受體菌為E. coli DH5&;alpha;菌株。E. coli DH5&;alpha;菌株帶有&;beta;-半乳糖苷酶C端部分序列的編碼信息。載體質(zhì)粒DNA pBS上帶有&;beta;-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調(diào)控序列和&;beta;-半乳糖苷酶N端146個氨基酸的編碼序列。(這個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點,但并沒有破壞lacZ的閱讀框架,不影響其正常功能。)
在各自獨立的情況下,pBS和DH5&;alpha;編碼的&;beta;-半乳糖苷酶的片段都沒有酶活性。但在pBS和DH5&;alpha;融為一體時可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。
這種lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的&;beta;-半乳糖苷酸陰性突變體之間實現(xiàn)互補的現(xiàn)象叫&;alpha;-互補。
2)實驗用顯色方法
實驗中使用X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-&;beta;-D-半乳糖苷)和IPTG(異丙基硫代-&;beta;-D-半乳糖苷)而非直接使用&;beta;-半乳糖。X-gal 以及 &;beta;-半乳糖均為 &;beta;-半乳糖苷酶底物,但是不能誘導&;beta;-半乳糖苷酶操縱子。實驗中使用IPTG以誘導&;beta;-半乳糖苷酶操縱子。在&;beta;-半乳糖苷酶作用下生成深藍色產(chǎn)物
 

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