无码人妻久久一区二区三区蜜桃,十八禁久久成人一区二区,人妻厨房出轨上司hd院线波多野,宝宝好涨水快流出来免费视频

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞凍存方法、步驟及注意事項(xiàng)
細(xì)胞凍存方法、步驟及注意事項(xiàng)
更新時(shí)間:2020-03-02   點(diǎn)擊次數(shù):4821次

細(xì)胞越來(lái)越受廣大科研者的喜愛(ài),但細(xì)胞不像人們想象中那么強(qiáng)大,在培養(yǎng)復(fù)蘇等過(guò)程中稍有不慎就不可能導(dǎo)致它的死亡。而且它必須是是在無(wú)污染的條件下培養(yǎng),復(fù)蘇才能保證實(shí)驗(yàn)效果。在此公司技術(shù)為您詳細(xì)總結(jié)細(xì)胞的正確冷凍保存方法、保存詳細(xì)步驟,相關(guān)注意事項(xiàng)如下:
 
一、保存方法(主要有兩個(gè)):
(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘→ -20℃30分鐘→ -80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí),以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 
(2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。 

二、步驟: 
(1)冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情形。 
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):將DMSO加入新鮮培養(yǎng)基中,*后濃度為5~10%,混合均勻,置于室溫下待用。
(3)依細(xì)胞繼代培養(yǎng)之操作,收集培養(yǎng)之細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
(4)離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。 

三、注意事項(xiàng): 
(1)欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好(logphase)且存活率高之狀態(tài),約為80–90%致密度。細(xì)胞凍存前應(yīng)保證細(xì)胞的活力好,無(wú)污染 
(2)冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì),例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
(3)3.一定要保證DMSO的濃度是10%,凍細(xì)胞要舍得用進(jìn)口的DMSO
(4)注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),無(wú)菌且無(wú)色(以0.22micron FGLP Telflon過(guò)濾或是直接購(gòu)買(mǎi)無(wú)菌產(chǎn)品,如Sigma D-2650),以5~10ml小體積分裝,4℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。
(5)慢凍,快解凍。細(xì)胞在 -15 度左右胞內(nèi)形成結(jié)晶對(duì)細(xì)胞損傷,緩慢降溫有助于減少損傷,故放入 -20 度冰箱中凍存可實(shí)現(xiàn)緩慢降溫較為方便,保存時(shí)間過(guò)久會(huì)影響細(xì)胞活力。

上海通蔚生物科技有限公司

上海通蔚生物科技有限公司

地址:上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號(hào)3463室

主營(yíng)產(chǎn)品:ELISA檢測(cè)試劑盒,ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,豚鼠ELISA試劑盒,兔ELISA試劑盒,羊ELISA試劑盒,牛ELISA試劑盒,雞ELISA試劑盒,鴨ELISA試劑盒

©2019 版權(quán)所有:上海通蔚生物科技有限公司  備案號(hào):滬ICP備14033764號(hào)-3  總訪問(wèn)量:1098899  站點(diǎn)地圖  技術(shù)支持:環(huán)保在線  管理登陸

亚洲精品乱码久久久久久v| 国模无码人体一区二区| 免费精品国偷自产在线青年| 上课忘穿内裤被老师摸到高潮| 欧美性受xxxx狂喷水| 免费看又黄又无码的网站| 欧美熟妇另类久久久久久不卡| 国语做受对白XXXXX在线| 中文字幕在线观看| 人人妻人人澡人人爽欧美精品| 国产成人无码一区二区三区在线| 国产日韩成人内射视频| 国产精品久久久久久人妻精品| 久久99精品久久只有精品| aaaaa级少妇高潮大片免费看| 97色伦亚洲自偷| 中文字幕精品一区二区精品| eeuss影院www在线观看| 色欲老女人人妻综合网| YELLOW日本高清在线| 精品国产人妻一区二区三区| 无人区码一码二码W358CC| 无码专区AAAAAA免费视频| 在线观看国产精品| 在线观看国产精品| 亚洲色自偷自拍另类小说| 亚洲熟妇av一区| 国内永久免费crm系统| 国产香蕉97碰碰久久人人| 又嫩又硬又黄又爽的视频| 人妻av无码一区二区三区| 99久久久无码国产精品性| 欧美变态口味重另类在线视频| 一本大道无码人妻精品专区| 成人区精品一区二区婷婷| 亚洲小说春色综合另类| 色噜噜狠狠一区二区三区| 精品无码人妻一区二区免费av| 武侠 欧美 另类 人妻| 日韩精品无码专区免费播放| 蜜桃影片在线播放网站免费观看|