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時(shí)值盛夏,再次迎來(lái)了ELISA科研高峰期
更新時(shí)間:2018-08-06   點(diǎn)擊次數(shù):2494次

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在ELISA實(shí)驗(yàn)中,洗滌是關(guān)鍵步驟之一。而有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果,這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景(殘留量)和差異。下面我們就一起來(lái)看看今天的重點(diǎn)內(nèi)容,上海通蔚生物與您初夏談?wù)fELISA抽吸的操作技巧。
殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會(huì)增加背景信號(hào)。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。吸液高度會(huì)明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大,那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部,那么也會(huì)使吸液效率降低,殘留量增加。

 目前的洗板機(jī)一般使用兩種類(lèi)型的洗頭:剛性和浮動(dòng)的。浮動(dòng)洗頭中的吸頭可在洗滌過(guò)程中自由上下移動(dòng),而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢?。使用剛性洗頭的洗滌操作在優(yōu)化起來(lái)更為復(fù)雜,因?yàn)槟阈枰浅W屑?xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實(shí)驗(yàn)室使用幾種不同的板,那可能會(huì)很耗時(shí)。在使用浮動(dòng)洗頭時(shí),吸頭會(huì)降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要,因此洗頭會(huì)下降到底部。
    抽吸的位置也對(duì)殘留量有著重要影響;如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)(這很常見(jiàn),因?yàn)楦?,那么抽吸的位置需要優(yōu)化。*的位置取決于洗頭的性狀,但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間,即使這是所有洗頭zui常見(jiàn)的默認(rèn)位置。一般來(lái)說(shuō),*位置在孔中間與孔壁之間的某處。
    反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。
   

ELISA試劑盒如果沒(méi)有自動(dòng)洗板機(jī),采用手工洗滌,那么也需要注意幾點(diǎn)。使用8道或12道微量移液器,采用倒吸的方法進(jìn)行洗滌;不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時(shí)需保證微孔板平放,將洗滌液注滿(mǎn)各孔,但盡量避免漏液,以每孔300 μl為宜;板洗次數(shù)一般為3次,要保證洗板的浸泡時(shí)間,每次浸泡時(shí)間一般為30-60 秒;盡量減少洗液殘留量,推薦每次洗板后進(jìn)行拍板,并及時(shí)更換吸水紙,避免吸水紙的碎屑粘到反應(yīng)孔內(nèi)。
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