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人ELISA試劑盒樣本的步驟
更新時間:2015-05-04   點擊次數(shù):2429次

    因此可以說基因工程就是分子生物學(xué)的工程應(yīng)用。人ELISA試劑盒現(xiàn)在基因工程所展現(xiàn)出的強大生命力和巨大的經(jīng)濟發(fā)展?jié)摿?得益于分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展,而且有證據(jù)表明,基因工程的進一步發(fā)展仍然要依賴于分子生物學(xué)研究的發(fā)展。

    顧名思義,分子生物學(xué)就是研究生物大分子之間相互關(guān)系和作用的一門學(xué)科,而生物大分子主要是指基因和蛋白質(zhì)兩大類;分子生物學(xué)以遺傳學(xué)、生物化學(xué)、細胞生物學(xué)等學(xué)科為基礎(chǔ)。從分子水平上對生物體的多種生命現(xiàn)象進行研究;分子生物學(xué)在理論和實踐中的發(fā)展也為基因工程的出現(xiàn)和發(fā)展打下了良好的基礎(chǔ),人ELISA試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
人ELISA試劑盒中zui常用的酶為HRP和ALP。
(1)HRP:是一種糖蛋白,含糖量約18%,分子量為44kD,在蔬菜作物辣根中含量很高。HRP是一種復(fù)合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素) 結(jié)合形成一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶為五色糖蛋白,在275nm波長處有zui高吸收峰;輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán),是酶的活性基團,在403nm波長處有zui高吸收峰。HRP的純度用純度值(reinhartzahl,RZ)表示,RZ=A403nm/A275nm,即403nm的吸光度與280nm的吸光度之比,高純度HRP的RZ值應(yīng)≥3.0。HRP質(zhì)量的另一重要指標(biāo)是酶活力,以單位(unit,U)表示。用于標(biāo)記的HRP比活性應(yīng)≥250U/mg。HRP的作用底物為H202,催化下列反應(yīng);
在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,必然有使用微量加樣器加入。

    注意的關(guān)鍵點是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。人ELISA試劑盒出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以,有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

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